微生物檢查方法驗證方法及測試（shì）菌種有哪些

微生物學檢（jiǎn）查（chá）方法包括（kuò）微（wēi）生物限度檢（jiǎn）查法和無菌檢（jiǎn）查法。微生物限度（dù）檢查法是檢查非規定滅（miè）菌製劑及原輔料受微牛物汙染程度，包括細菌、黴菌等菌種的數目（mù）及控製（zhì）菌檢查（chá）。如外用製劑須檢查和驗證銅綠假單胞菌，若（ruò）製劑含藥材原粉等，述需檢查和驗證大腸菌群和(或（huò）)沙門菌（jun1）。通過不同給藥（yào）途徑，因此臨（lín）床給藥途徑在微生（shēng）物限度檢查和方法驗證中有著舉（jǔ）足輕重的地位。

微生物檢查方法驗證（zhèng）方法及測（cè）試菌種有哪些

一、細菌黴菌及（jí）酵（jiào）母菌計數方法的驗證

1、驗證菌種

(1)大腸埃希菌(大腸杆菌)[CMCC(B)44102];

(2)枯草芽孢杆菌(枯草芽孢杆菌)[CMCC(B)63501];

(3)白色念（niàn）珠菌(白（bái）色念珠菌)[CMCC(F)98001];

(4)黑曲黴(黑曲黴)[CMCC(F)98003];

該4種菌株具有（yǒu）普遍的（de）代表性，5種菌分別代表不同的（de）微生（shēng）物類別，(1)(2)(3)屬細菌，(4)真菌，(5)黴菌。驗證所用的標準菌種的傳代數不得過5代。

2、驗證方法

1平皿法

對無明顯抑菌作用的水溶性製劑，采（cǎi）用該方法進行微生物限度檢查法的驗證。方法驗證的主要思路：加菌回收。

2培養基稀釋法

略帶抑菌作用的水溶性製劑(上述常（cháng）規平皿法試驗（yàn）菌回（huí）收率低於70%的)，可采用該方法進行方法驗證。

3薄膜過濾法

一般適用於對可溶性抑菌製劑。主要思路：濾除（chú）抑菌成（chéng）分，加菌回收。

4離心沉定集菌法

主要思路：離心（xīn）沉定，離心集菌。

5中和法

主要思路：製備供試液（yè）過程中加入適宜的鈍化劑、酶等中和劑，以消除（chú）或減（jiǎn）小（xiǎo）製（zhì）劑中的抑菌（jun1）性。

二、控製菌的（de）驗證（zhèng）

1、驗證菌種

(1)大腸埃希菌(大腸杆菌)[CMCC(B)44102];

(2)乙型副傷寒沙門菌CMCC(B)50094];

(3)銅綠假（jiǎ）單胞菌(銅綠假單（dān）胞（bāo）菌)[CMCC(B)10104];

(4)生孢梭菌(生孢梭菌)[CMCC(B)64941];

驗證時，依照各品種項下微生物限度標準中規定檢查的（de）控製菌選（xuǎn）擇相（xiàng）應驗證的菌株。驗證（zhèng）大腸菌群檢查法時，應采用大腸（cháng）埃希菌作為驗證菌。

2、驗證方法

(1)試驗組：取規定（dìng）量供試液(各控製菌（jun1）檢查方（fāng）法下均有規定)及10~100cfu試驗菌加入（rù）增菌培養基中，依相應的控製菌（jun1）檢查法進行檢查。當（dāng）采用薄膜過濾法時，試驗菌液應加在（zài）最後一次衝洗液中，衝洗後，取出濾膜接種（zhǒng）到（dào）增菌培養基中。

(2)陰（yīn）性菌對照組：設立（lì）陰性菌對照組是為了驗證該（gāi）控（kòng）製（zhì）菌的檢查方法的專屬性（xìng）。方法同試驗組，驗證大腸埃希菌、大腸菌群（qún）、沙（shā）門菌（jun1）檢查法時的陰性（xìng）對照用，驗證銅綠假單胞菌檢查（chá）法時得陰性對照菌采用大腸埃希菌。

結果判斷：陰性菌對照組不得檢出。若試驗組檢出試驗菌，證明可按（àn）此（cǐ）供試液製備方法和控製菌檢查法進行控製菌檢查。若試（shì）驗（yàn）組未檢出試驗菌，應消除供試品種（zhǒng）的抑菌活性，方法同細菌、黴菌和酵母菌檢查方法驗證(稀釋法、薄膜過濾（lǜ）法、中和劑（jì）、沉定法)，建立（lì）新的方法，重新驗證（zhèng）。

微生物檢查方（fāng）法驗證方法及測試菌（jun1）種有哪些